Beckman Coulter CytoFLEX SRT 流式細胞分選儀 Sorter

CytoFLEX SRT產品特色

CytoFLEX系列的Sorter

超高靈敏度的多色應用。
參數與 CytoFLEX S VBYR 系列匹配。
用於CytoFLEX SRT的CytExpert軟體界面直觀，方便多色分析。

容易分選

從啟動到開始樣品分選僅需 30分鐘。
整個分選過程自動設置和保持分選液流，提高易用性。
可靠的設計且擁有專業團隊提供諮詢。

精密的分選邏輯

超過15種螢光顏色用於區分細胞群。
4向分選，混合模式分選。
能夠捕捉abort細胞和保存寶貴的細胞，提高產率。

保留高品質細胞

高回收率和分選後存活率。
Cyclone Movement系統（包括索引分選 Index Sorting）確保單細胞精確分選。
分選收集容器包括樣品管，載玻片或多孔板。

何謂細胞分選 (Cell Sorting) ?

一、定義：在萬千細胞之中，找到你要的那一個

細胞分選（Cell Sorting）是一種從混合細胞群體中分離出特定細胞的技術。
這過程主要透過流式細胞儀（Flow Cytometer） 來完成。當細胞經過雷射偵測區時，每個細胞會被光線照射，並產生散射光與螢光訊號。儀器根據這些訊號判斷細胞的大小、顆粒度與特定標記（例如 CD4、CD8、CD45 之類的抗原）。而具備「分選功能」的流式儀（例如 CytoFLEX SRT），能進一步把這些細胞 「實體地分開」 ——不是只看，而是真的把它收集起來。

二、原理：從光學分析到靜電偏轉的精密舞步
分選過程可以分為四個階段：
細胞進樣（Fluidics）
細胞懸浮液被注入細流中，每個細胞被鞘液「包裹」在液滴裡，單獨通過雷射偵測區。
光學偵測（Optics）
細胞被雷射照射，根據其大小、顆粒度與標記螢光強度產生不同訊號。
訊號判讀與分類（Electronics + Decision）
電腦即時分析訊號，判定此細胞屬於哪一群（例如陽性或陰性群）。
液滴帶電與偏轉收集（Sorting）
當細胞離開偵測區時，它所屬的液滴被賦予正或負電荷，
再由電場偏轉進入對應的收集管。
這一步，就是「分選（sorting）」的靈魂。

🔬 三、常見應用場景

領域	典型應用	說明
免疫學	分離 T 細胞亞群（CD4⁺ / CD8⁺）	研究免疫反應或製備 CAR-T 細胞。
幹細胞研究	挑選特定標記的幹細胞（如 CD34⁺）	用於移植或分化研究。
癌症生物學	分離腫瘤異質群細胞	比較腫瘤幹細胞與一般癌細胞差異。
外泌體 / EV 研究	分析與回收微小囊泡	對應像 CytoFLEX SRT 這類高靈敏儀器。
分子生物學	單細胞 RNA-Seq 前的細胞分群	提高下游分析的準確性

🌈 四、技術進化與 CytoFLEX SRT 的位置

傳統流式細胞儀只能「觀察」，但細胞分選儀能「行動」；
傳統分選儀操作繁瑣、需要專家(專人操作)；
而 CytoFLEX SRT 這類新一代系統，
則強調——

簡化流程（30 分鐘內啟動）
維持細胞活性（溫控與冷卻設計）
支援索引分選（Index Sorting）：讓研究者能回溯每個細胞的表型與位置

它讓「流式分析」不再只是看圖表，而是精確取樣、進入下一階段研究的橋樑。

VSSC（紫光側向散射）

一、什麼是 VSSC / V-Side Scatter

在流式細胞儀／分選儀中，“SSC（Side Scatter）”代表的是細胞／粒子側向散射光的偵測，用來反映細胞內部結構、顆粒度或折射率差異。

當用的是 紫光雷射（≈ 405 nm 波長） 來做側向散射偵測時，就會稱作 Violet Side Scatter（VSSC）。

換句話說：

SSC：側向散射偵測器（通常用 488 nm 或其他可見雷射）
VSSC：使用 405 nm 紫光做的側向散射偵測

二、物理原理與為什麼 VSSC 有優勢

要理解 VSSC 的優勢，就得回到光散射理論（Mie 理論／Rayleigh 散射）那邊去。以下是重點：

波長越短 → 散射強度越高
基本上，光被粒子散射的強度與波長呈反比：波長越短（紫光比藍光短），對更小的微粒散射信號會比較強。
折射率差的放大作用
紫光的折射／折向效應比長波光更敏感，所以當粒子與環境折射率有差異時，紫光可以更強調那個差異，讓微小微粒或低折射率粒子更容易被偵測。
改善解析下限
因為上述優勢，使用 VSSC 可以把可偵測／可分辨的粒子尺寸下限往更小的方向推。舉例來說：CytoFLEX 使用 VSSC 時，可以將 70 nm 聚苯乙烯（PS）微粒與 98.6 nm 矽（Si）粒子從雜訊中分出來。
相比之下，傳統的普通 SSC（例如 488 nm 激發）在小粒子檢測上就比較吃力。
應對低折射率粒子
在檢測 EV（extracellular vesicles，細胞外囊泡）、病毒這類折射率接近水／緩衝液的粒子時，紫光散射有助於更明顯地區分信號與背景。許多研究便指出，用 VSSC 可以改善 EV 群體的解析能力。

三、VSSC 的主要優點（Why VSSC matters）

優點	說明
提升微粒偵測靈敏度	能偵測更小尺寸的粒子，比傳統 SSC 更向下延伸解析範圍。
改善信號與噪訊比（S/N）	紫光散射更能凸顯微粒與背景介質的差異，降低被背景雜訊淹沒的機率。
更適合分析 EV / 病毒 / 奈米粒子	在生物樣本中，這些微粒常常在傳統 SSC 下難以辨識，用 VSSC 可讓它們「浮出來」。
與現有 SSC 配合使用	通常分析設計中會同時用 SSC + VSSC，交叉驗證與加強判別能力。
無需過度標記 / 放大技術	用光學散射本身就可以分辨比標記螢光還要小的一些微粒，減少對染劑或增強手段的依賴。

液流自動設置和保持(Droplet Calibration)

(Auto Maintain Droplet)

功能	系統動作	技術重點	實際意義
Droplet Calibration（液滴校準）	自動掃描頻率與振幅，形成最佳液滴大小與間距。	精確控制液滴生成，使每個細胞位於液滴中心。	提高分選精準度，減少錯誤充電與液滴偏移。
Side Stream Calibration（側流校準）	在完成液滴校準後，自動逐一校正各側流的充電相位、電壓與偏轉角，並保持廢液流垂直。	利用感測器持續監控液流方向與電場穩定性。	確保分選液流方向準確，避免交叉污染。
Auto Maintain（自動維持）	系統量測液滴影像像素，依據變化調整壓電驅動電壓以維持液滴延遲（drop delay）。	閉環回饋控制，自動修正液滴生成偏差。	長時間操作仍能保持穩定的分選軌跡與精度。

自動回復液滴狀態(Auto Recovery)

如果軟體檢測到液流不穩定且在 1 分鐘內無法通過自動保持功能恢復，自動保持功能將關閉，系統啟動自動恢復功能。

在自動恢復中，系統依次停止樣品流，伸出廢液收集器，啟動流動池除氣泡功能。如果自動恢復成功，系統重新進入自動保持狀態並自動重啟分選。如果自動恢復失敗，系統停止分選，需要用戶進行干預，比如清洗噴嘴座、進行分選校準等。

PMT（光電倍增管） vs APD（雪崩光電二極體）

項目	PMT（Photomultiplier Tube）光電倍增管	APD（Avalanche Photodiode）雪崩光電二極體
工作原理	利用光子撞擊光電陰極產生電子，經多級倍增電極（dynode chain）放大訊號。	光子進入半導體 PN 接面產生電子–電洞對，在高電壓下觸發「雪崩倍增效應」。
偵測型態	真空管式電子倍增器。	固態半導體感測器。
輸出信號	電流脈衝，經放大後讀出。	電流直接放大後輸出（增益在晶體內完成）。

Share the Post: