一、各種細胞計數的方法、原理及優缺點
| 方法 | 原理 | 主要優點 | 主要限制 | 適用情境 |
|---|---|---|---|---|
| Hemocytometer（血球計數板） | 顯微鏡下於已知體積網格中人工計數 | 成本低、直觀可視、操作彈性高 | 人為誤差高、效率低 | 研究室日常培養、教學 |
| 自動細胞計數儀 | 影像辨識自動分析細胞數與活性 | 快速、再現性佳、標準化 | 對細胞聚集敏感 | 生技公司 QC、例行操作 |
| Coulter Counter | 細胞通過微孔產生電阻抗變化 | 高通量、可量測細胞大小分佈 | 無法區分活死、對雜質敏感 | 懸浮細胞、製程監控 |
| Flow Cytometry | 雷射散射光與螢光訊號逐顆分析 | 多參數分析、可同時做表型鑑定 | 儀器昂貴、操作門檻高 | 免疫學、細胞治療 |
| 螢光染料計數法 | 螢光染劑標記後定量細胞或細胞核 | 特異性高、靈敏度佳 | 需螢光設備、染劑可能干擾 | 藥物篩選、研究 |
| ATP 定量法 | 以 ATP 含量推估活細胞數 | 極適合高通量、自動化 | 非實際細胞數、需校正 | HTS、藥效評估 |
| OD / Turbidity | 測量培養液濁度推估細胞量 | 快速、連續監測 | 僅限微生物、無活死資訊 | 細菌、酵母培養 |
| CFU 計數 | 培養後計算可形成菌落的細胞 | 法規接受度高、定義嚴謹 | 耗時、非即時 | 微生物檢測、GMP |
二、Hemocytometer（血球計數盤/板)
🧪 MARIENFELD Superior Neubauer improved
✅ 顯微鏡下精準細胞計數（尤其是懸浮細胞）
✅ 可用於 手動活死判讀（配合染色法如 Trypan Blue 等）
✅ 細胞計數領域的 Golden Standard
✅ Bright-line 格線在視覺上對比更佳、讀數更直觀
1. 產品介紹與規格 (Product Specifications)
- 這款計數板是由特殊的光學玻璃製成，核心特點在於其**改良型紐鮑爾（Neubauer improved）**網格設計。
- • 雙腔室設計：中央有 H 形凹槽（Moat），形成上下兩個獨立的計數池，可同時檢測兩個樣本或進行重複對照。
- • 標準深度：蓋玻片與計數區之間的深度嚴格控制在 0.1 mm (100 µm)。
- • 網格結構：
- ◦ 總面積：3 mm×3 mm=9 mm2。
- ◦ 大方格：共有9 個 1 mm2 的大方格。
- ◦ 中央計數區：中央的大方格（通常用於紅血球或血小板）被進一步細分為 25 個中格（Group squares），每個中格內又包含16 個小格。
- ◦ 最小單位：最小的小格面積為 0.05 mm×0.05 mm=0.0025 mm2。
- • 兩款光學版本：
- ◦ Dark-Line（暗線型）：網格直接刻在玻璃上。在顯微鏡下，背景明亮，線條呈暗色。
- ◦ Bright-Line（亮線型）：計數區鍍有金屬塗層（如銠），網格蝕刻在塗層上。在顯微鏡下，背景呈灰色（半透明），線條呈現明亮的白色，對比度高，較不易疲勞。
2. 標準使用步驟 (Step-by-Step Protocol)
為了獲得準確的數據，請遵循以下標準化流程：
步驟一：準備與清潔 (Preparation)
1. 使用 70% 酒精或蒸餾水徹底清潔計數板與專用蓋玻片，並使用無塵紙或丙酮擦拭乾燥，確保無指紋與灰塵。
2. 將蓋玻片輕輕放置在計數板的中央支架上。
3. 關鍵檢查：觀察蓋玻片與支持柱接觸處是否出現彩虹狀的**「牛頓環（Newton’s rings）」**。這代表蓋玻片已緊密貼合，腔室深度精確為 0.1 mm。
步驟二：樣本製備與加樣 (Sample Loading)
1. 充分混勻細胞懸浮液。若需檢測存活率，將細胞液與Trypan Blue以 1:1 混合。 ( Trypan blue會滲入死細胞中而呈色，而活細胞因細胞膜完整，染料無法滲入而不會呈色。)
2. 使用移液器吸取約 10 µL 的樣本。
3. 將槍頭尖端抵在蓋玻片邊緣與計數板的 V 型槽口處，緩慢打出液體。利用毛細作用讓液體吸入並填滿腔室。
4. 注意：不可過度充填（導致蓋玻片浮起）或產生氣泡，否則需清洗後重做。
步驟三：顯微鏡觀察與計數 (Counting)
1. 將計數板置於顯微鏡下，使用 10x 或 40x 物鏡觀察。
2. 選擇計數區域：
◦ 白血球/大細胞：通常計數四個角落的大方格（每個 1 mm2）。
◦ 紅血球/小細胞：通常計數中央大方格內的 5 個中格（4 個角 + 1 個中心）。
3. 計數規則：對於壓在格線上的細胞，遵循**「計上不計下，計左不計右」**（L-rule）原則，以避免重複計算。
步驟四：濃度換算 (Calculation)
使用以下公式計算每毫升的細胞濃度（Cells/mL）：
• 說明：10,000 是體積換算係數（因為 1 個大方格體積為 0.1μL=10−4 mL）。
• 範例：若在 4 個大方格中總共數到 200 個細胞，稀釋倍數為 2（Trypan Blue染色），則： (200÷4)×2×10,000=1,000,000 cells/mL。
步驟五：清潔與保存 (Cleaning)
實驗結束後，應立即取下蓋玻片，用清水或溫和清潔劑沖洗計數板，並用軟布擦乾。切勿使用粗糙材質擦拭，以免刮傷網格影響精度
訂購資訊
◦ Dark-Line（暗線型） 型號: 650030
◦ Bright-Line（亮線型）型號: 650010
S-Y Double Grides Counting (Slide 10)
這款產品的設計與傳統兩孔的血球計數板不同，單片玻片上設有 10 個獨立的計數池，主要用於標準化尿液沉渣檢查（Standardized Urinalysis）及體液細胞計數。
以下為該產品的詳細介紹與使用步驟：
1. 產品規格與特點 (Product Introduction)
• 產品型號： SY9502。
• 結構設計： 每一片計數盤（Slide）上含有 10 個獨立計數樣區（Chambers），分為上下兩排，每排各 5 個，並標有數字編號（1-10）以便辨識。
• 主要用途： 標準化尿液沉渣檢查、體液細胞計數。
• 材質特性： 具有良好的透明度，且為拋棄式設計，清潔安全，能避免交叉污染。
2. 使用步驟 (Usage Steps)
由於這是一款拋棄式且具備特殊加樣孔設計的產品，使用流程比傳統玻璃計數板更為簡便：
步驟一：樣本製備
• 尿液檢查： 將尿液離心後棄去上清液，保留沉渣，並將沉渣輕輕混勻。
• 細胞計數： 若為細胞懸浮液，請確保細胞充分混勻，避免沉降導致誤差。
步驟二：加樣 (Loading)
1. 取出 S-Y 計數盤，無需放置蓋玻片（因為是一體成型設計，蓋玻片結構已整合在上方）。
2. 使用移液器（Pipette）吸取樣本。
3. 將槍頭尖端接觸計數池上方的半圓形加樣孔（Unique all-holes）。
4. 緩慢打出液體，利用毛細作用讓樣本自動充滿計數池。
步驟三：靜置與觀察 (Settling & Observation)
1. 靜置片刻，讓尿液中的有形成分（如紅血球、白血球、上皮細胞）或懸浮細胞沉降到同一焦平面上。
2. 將計數盤放置於顯微鏡載物台上。
3. 利用計數盤上的編號（1~10）記錄不同病患或不同樣本的數據。
步驟四：廢棄處理 (Disposal)
• 實驗結束後，無需清洗。請將使用過的 S-Y 計數盤直接丟入感染性廢棄物垃圾桶中，確保生物安全。
