Beckman Coulter 乾式抗體系列
白血病與淋巴瘤的流式細胞檢驗10色Ready-to-Use套組
1. 概述
- ClearLLab 10C 系統為一套 IVD（體外診斷）用 的免疫分型試劑流程，專為白血病及淋巴瘤（L&L：leukemia & lymphoma）設計。
- 該系統包含：預混合乾式抗體組合（10 色／10 抗體）、品管細胞、補償試劑組、專用分析軟體等。
- 使用 平台為 Navios EX（或 Navios 系列），3 雷射、10 色檢測通道。
- 系統旨在降低手動配製抗體 cocktail 的錯誤機率、簡化流程、提升標準化與可重複性(再現性)。
2. 主要特色
- 乾式單元化抗體組合：利用 Beckman Coulter 的 DURA Innovations 技術，預先混合並乾燥抗體，減少手動操作。
- 四支預先混合面板：覆蓋淋巴系與骨髓系的免疫分型需求
- 品管與標準化支援：包含 ClearLLab Control Cells（含正常/異常型態）、補償試劑組、資料分析模板、案例訓練資源。
- 臨床驗證：多中心研究顯示與實驗室開發試劑（LDTs）相比，敏感度約 96%、特異度約 95%。
多中心臨床試驗研究設計與方法
- 設計：多中心、前瞻性方法學評估；所有檢體以 4 條 10 色管同時測（LN 樣本量有限時僅上 B、T 管）。
- 儀器：Beckman Coulter Navios / Navios EX；每日用 Flow Check Pro 與 Flow Set Pro 監測性能；以 Levy–Jennings 圖追蹤。
- 補償：使用 ClearLLab 補償套件（10 個單色乾式管） 建立 10 色補償矩陣；月更一次並每日以控細胞視覺與比例驗證。
- 品管：ClearLLab Control Cells（正常版＋加 spike CD34⁺ 版）每日流程控；若超出允收範圍不進樣。
- 分析：每管收 ≥50,000 個 CD45⁺ events；偵測下限任意定為 1%；使用 Kaluza C 預設模板判讀。
- 對照：
- 與 最終臨床診斷（依 WHO 2016 + Bethesda 建議，形態、分子、遺傳整合）；
- 與各院所 LDT（5 色或 10 色平台不等）。
代表性案例
- CLL：CD19⁺/CD5⁺/CD200⁺/κ或λ 限制；
- B-ALL（CD10⁻ 變異）：CD34⁺/CD19⁺/部分 CD20；
- T-LGL：CD3⁺、CD2 微弱、CD8 微弱；
- T-cell 白血病：表面 CD3⁻，CD7⁺/CD2⁺；
- AML：CD117 亮、CD123⁺、CD64⁻、CD45 微弱；
- MDS：例示 11% 芽細胞；
- 急性單核白血病：CD34⁻/CD13⁻/CD33⁺/CD64⁺；
- 多發性骨髓瘤：CD38 亮、CD45 微弱、部分 CD117、CD19 微弱、CD34⁻。
- APL：CD34⁻/CD15⁻/HLA-DR⁻/CD13⁺/CD33⁺/CD117⁺/CD123⁺（M2 管可提示，仍需形態與細胞遺傳確證）。
3. 面板與標記（簡要）
四條預配置抗體管（每管含 10 色／10 抗體）：
| 面板 | 適用 lineage | 抗體標記（10 個） |
|---|---|---|
| B-Cell 面板 | B 淋巴細胞系 | Kappa, Lambda, CD10, CD5, CD200, CD34, CD38, CD20, CD19, CD45 |
| T-Cell 面板 | T 淋巴細胞系 | TCR γδ, CD4, CD2, CD56, CD5, CD34, CD7, CD8, CD3, CD45 |
| M1 面板 | 骨髓系／早期髓系 | CD16, CD7, CD10, CD13, CD64, CD34, CD14, HLA-DR, CD11b, CD45 |
| M2 面板 | 骨髓系／進階髓系 | CD15, CD123, CD117, CD13, CD33, CD34, CD38, HLA-DR, CD19, CD45 |
備註：每管十色十抗，對應 Navios 系統的三激光（488 nm、638 nm、405 nm）配置。
| 管別 | 488 nm | 488 nm | 488 nm | 488 nm | 488 nm | 638 nm | 638 nm | 638 nm | 405 nm | 405 nm |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B Cell | FITC Kappa | PE Lambda | ECD CD10 | PE-Cy5.5 CD5 | PE-Cy7 CD200 | APC CD34 | APC-A700 CD38 | APC-A750 CD20 | PacB CD19 | KrO CD45 |
| T Cell | FITC TCRγδ | PE CD4 | ECD CD2 | PE-Cy5.5 CD56 | PE-Cy7 CD5 | APC CD34 | APC-A700 CD7 | APC-A750 CD8 | PacB CD3 | KrO CD45 |
| M1（髓系/單核成熟） | FITC CD16 | PE CD7 | ECD CD10 | PE-Cy5.5 CD13 | PE-Cy7 CD64 | APC CD34 | APC-A700 CD14 | APC-A750 HLA-DR | PacB CD11b | KrO CD45 |
| M2（髓母/早期） | FITC CD15 | PE CD123 | ECD CD117 | PE-Cy5.5 CD13 | PE-Cy7 CD33 | APC CD34 | APC-A700 CD38 | APC-A750 HLA-DR | PacB CD19 | KrO CD45 |
設計亮點
- CD34 與 CD45 為跨管骨幹
- B 管加入 CD200：快速區辨 CLL（CD200⁺） 與 MCL（多為 CD200⁻）。
- T 管含 TCRγδ：偵測 γδ T 異常群（如 T-LGL）。
- M1/M2 互補：M1 覆蓋單核系成熟；M2 擷取 APL 典型免疫表型（CD34⁻、HLA-DR⁻、CD13⁺、CD33⁺、CD117⁺、CD123⁺）之偵測線索。
4. 適用樣本與用途
- 適用於 外週血、骨髓、淋巴結 樣本。抗凝可為 K₂EDTA、ACD 或 heparin。
- 用以輔助診斷 — 白血病、慢性白血病、非霍奇金淋巴瘤、多發性骨髓瘤、骨髓增殖性及骨髓增殖/骨髓異常症等。
- 結果需由病理醫師或相當專業人士與臨床及其他檢體結果綜合解讀。
5. 流程與實驗室優勢
- 從樣本處理 → 抗體染色（乾式／預混）→ 資料採集 → 分析報告，流程標準化。
- 減少人工準備抗體 cocktail 時的 pipetting 錯誤、重複驗證工作。
- 有預設分析模板（如 Kaluza C 軟體）可提升分析效率與一致性。
- 品管物料齊備（控細胞、補償套件），可縮短驗證時間以符合 ISO 15189 等實驗室規範。
6. ClearLLab 的最佳平台 DxFLEX IVD Flow Cytometer
- ClearLLab 10C 已被驗證可在 DxFLEX 臨床流式細胞儀上使用，且在美國屬於 10 色 IVD 合規組合（與 ClearLLab 10C Reagent System 搭配）
- 法規適用：在美國市場，DxFLEX 搭配 ClearLLab 10C 為核准的 10-color IVD 使用；FL11–FL13 等額外通道與其它應用屬 研究用 (RUO)。
- 硬體規格：DxFLEX 為 3 雷射、最多 13 螢光通道平台；與 ClearLLab 10C 的 10 色配置相容。
Beckman Coulter ClearLLab 10C Panels Casebook
以下為 《Beckman Coulter ClearLLab 10C Casebook》 主要內容的繁體中文整理與表格化摘要：
一、文件概述
| 項目 | 說明 |
|---|---|
| 全名 | ClearLLab 10C Panels Case Book (IVD Antibody Combinations for Leukemia/Lymphoma Analysis) |
| 出版單位 | Beckman Coulter Life Sciences |
| 用途 | 為血液腫瘤（白血病、淋巴瘤、骨髓異常症）之流式免疫表現型分析提供教學範例與標準化流程 |
| 適用儀器 | Navios、Navios EX、DxFLEX（10 色 IVD 配置） |
| 內容範圍 | 含 24 個臨床案例：正常血液、骨髓、淋巴結，以及 B/T/Myeloid 腫瘤樣本 |
二、分析背景與流程
| 流程階段 | 操作重點 |
|---|---|
| 1️⃣ 樣本準備 | 樣本來源：外周血、骨髓、淋巴結（抗凝劑 EDTA 或 ACD 或 Heparin）。使用 ClearLLab 10C 試劑組。 |
| 2️⃣ 抗原分析 | 同時偵測 10 種抗原組合；依 Tube （B、T、M1、M2）區分。 |
| 3️⃣ 鑑別邏輯 | 根據抗原表現 (+) 或 (–) 與螢光強度（高/低/減弱），建立免疫表現型。 |
| 4️⃣ 結果解讀 | 需結合臨床病史、形態學、染色體與分子結果。 |
| 5️⃣ 品質管控 | 每日以 ClearLLab Control Cells 與 Compensation Kit 進行儀器與染色校正。 |
三、ClearLLab 10C 四大面板（Panels）
| 管名 | FITC | PE | ECD | PC5.5 | PC7 | APC | APC-A700 | APC-A750 | Pacific Blue | Krome Orange |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B Tube (B96805) | Kappa | Lambda | CD10 | CD5 | CD200 | CD34 | CD38 | CD20 | CD19 | CD45 |
| T Tube (B96806) | TCRγδ | CD4 | CD2 | CD56 | CD5 | CD34 | CD7 | CD8 | CD3 | CD45 |
| M1 Tube (B96807) | CD16 | CD7 | CD10 | CD13 | CD64 | CD34 | CD14 | HLA-DR | CD11b | CD45 |
| M2 Tube (B96808) | CD15 | CD123 | CD117 | CD13 | CD33 | CD34 | CD38 | HLA-DR | CD19 | CD45 |
四、補償試劑 (Compensation Kit)
| 管號 | 抗體組合 | 目的 |
|---|---|---|
| B74074 | CD4 在 FITC、PE、ECD、PC5.5、PC7、APC、APC-A700、APC-A750、PB 及 CD8 於 KRO 通道 | 標準化每一雷射與通道補償設定，滿足 Bethesda 與 ICSH/ICCS 指南 |
五、臨床案例章節概覽（摘要）
| 範疇 | 案例 # | 疾病別 | 頁碼 |
|---|---|---|---|
| 正常樣本 | 1 – 3 | 正常外周血、骨髓、淋巴結 | 7 – 79 |
| B 細胞腫瘤 | 4 – 13 | B-ALL、CLL/SLL、MCL、漿細胞瘤、濾泡性淋巴瘤、胚中心 B 淋巴瘤等 | 80 – 321 |
| T 細胞腫瘤 | 14 – 17 | T-ALL、T-大顆粒淋巴細胞增生症等 | 322 – 417 |
| 骨髓/髓系腫瘤 | 18 – 24 | AML 各亞型、MDS | 418 – 562 |