壹、切向流過濾 (TFF)
🟦 左側：TFF（Tangential Flow Filtration）
- 流體 平行膜面流動（Tangential）
- 顆粒被「帶走」，不容易堆積
- 小分子往下穿透 → Permeate
- 大分子繼續流動 → Retentate
- 👉 視覺重點：
- 橫向箭頭（流動）＋向下箭頭（過濾）
- 顆粒分散、不堆積
- 👉 關鍵價值：
- 高通量
- 低 fouling
- 適合 EV / protein / biologics
🟥 右側：Dead-End Filtration
- 流體 垂直撞上膜面
- 顆粒直接堆積形成 cake / polarized layer
- 過濾越久 → 阻力越大
- 👉 視覺重點：
- 單一向下箭頭
- 上方堆積一層紅色「堵塞層」
- 👉 關鍵問題：
- 易堵塞
- 通量快速下降
- 壓力需求上升
HansaBioMed 中空纖維卡匣
- 採用切向流過濾 (TFF)技術，適合生物分子(如外泌體)的分離、純化、濃縮
- 胞外囊泡 (EV)、外泌體的好選擇
HansaBioMed 是胞外囊泡領域 (extracellular vesicles, EV) 的先驅，其TFF卡匣適用於EV、MV、exosome的濃縮、純化、去鹽、緩衝液置換等 - 可清洗、重複使用
TFF卡匣使用後可清洗，並重複使用數次 - 單獨無菌包裝
每支TFF卡匣出廠皆為無菌包裝，使用後也可 β 輻射滅菌 - 手動、儀器皆可操作
可依樣品量多寡選擇手動操作、或搭配Tanfil 100切向流過濾系統使用
訂購資訊 HBM-TFF1 HBM-TFFMV HBM-TFFEVS-S
| 項目 | HBM-TFF1 | HBM-TFFMV | HBM-TFFEVS-S |
|---|---|---|---|
| 產品名稱 | TFF-Easy | TFF Microvesicle | TFF EVs Small |
| 技術類型 | Tangential Flow Filtration | Tangential Flow Filtration | Tangential Flow Filtration |
| 應用定位 | 快速濃縮 / 入門款 | Microvesicle 分離 | 小尺寸 EV（exosome）分離 |
| 建議樣本類型 | Plasma / Urine / CM | Cell culture / biofluids | Plasma / Serum / CM |
| 處理體積 | 約 5–15 mL | 約 10–100 mL | 約 10–100 mL |
| 截留粒徑 / MWCO | ~500 kDa（廣泛濃縮） | >150 nm | ~50–150 nm |
| 回收率 | ~80–85% | 高（依樣本） | 高（EV optimized） |
| 操作時間 | 約 5–10 min | 約 15–30 min | 約 15–30 min |
| 主要功能 | 濃縮樣本 | 分離大型EV（MV） | 富集 exosome / small EV |
| 是否易堵塞 | 低（TFF特性） | 低 | 低 |
| 是否可Scale-up | 有限（桌上型） | 可（方法一致） | 可（方法一致） |
| 搭配建議 | + SEC（PURE-EVs） | + downstream analysis | + SEC / RNA分析 |
| 目標客群 | 初階使用者 / 臨床前 | EV研究者 | exosome研究 / biomarker |
| 產品策略角色 | Entry product（導流） | 分群分析工具 | 核心主力產品 |
建議搭配設備 ROCKER Tanfil 100 切向流過濾系統
產品規格
| 型號 | Tanfil 100 | |
| 技術數據 | ||
| 最大入口壓力 | 60 psig | |
| 最大壓力錶值 | 80 psig | |
| 循環流速 | 0 ~ 460 mL/min | |
| 系統最小工作體積 | 7 mL | |
| 儲液瓶 | PES 儲液瓶 500 mL | |
| 噪音值 | 55 dB | |
| 淨重 | 7.8 Kg | |
| 尺寸 (LxWxH) | 28 x 33 x 16 cm | |
| 電氣數據 | ||
| 輸入電源 | 100-240V | |
| 頻率 | 50 / 60Hz | |
| 最大功率 | 50W | |
| 安全性 | 馬達過載保護、保險絲 | |
| 其他 | ||
| 適用卡匣 | Pall, Minimate™ TFF Capsules、 HansaBioMed 中空纖維卡匣 Sartorius, Sartocon Slice 50 Merck, Pellicon® XL 50 Device* 若需要使用其它卡匣，請與翰新聯絡 | |
| 材質 | |||
| 儲液瓶 | PES | 壓力錶與液體接觸部位 | SS316 |
| 儲液瓶蓋 | PP | 壓力錶岐管 | PP |
| 儲液瓶O-ring | Silicone | 魯爾接頭 | SS316, PP |
| 磁石 | PTFE Coated | 魯爾接頭 O-ring | Silicone |
| 三向閥 | PC, POM | 管路 – ULTR-C | 矽膠 (鉑催化添加聚合)、TPE |
| * TPE: polypropylene-based thermoplastic elastomer (TPE) | 管路 – Pharmed BPT | TPE* | |
貳、SEC (Size Exclusion Chromatography Columns, second generation)粒徑篩析層析法
📊 PURE-EVs系列（SEC Columns）HansaBioMed產品
| 產品名稱 | Catalog No. | 類型 | 樣本體積 | EV回收區間 | 主要用途 | 核心特點 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| PURE-EVs | HBM-PEV-1 | 標準SEC column | ~0.5–1 mL | Fraction 7–10 | 一般EV純化 | 經典款，高重現性 |
| PURE-EVs 70 nm | HBM-PEV-70 | 高解析SEC | ~0.5–1 mL | 更精準（~70 nm cutoff） | 小EV / exosome | 提升純度、降低蛋白污染 |
| PURE-EVs 35 nm | HBM-PEV-35 | 超高解析SEC | ~0.5–1 mL | 更小粒徑EV | miRNA / biomarker | 極致純化 |
| miniPURE-EVs Spin Column | HBM-PEV-MINI | 離心式SEC | ~100–200 µL | 快速分離 | 小樣本 | 無需重力流、快速 |
| PURE-EVs Starter Kit | HBM-PEV-KIT | 套組 | 依組合 | 標準EV分離 | 新手入門 | 含column + buffer |
| PURE-EVs PRO | HBM-PEV-PRO | 高階SEC | ~1–2 mL | 高一致性 | 臨床 / 高標準研究 | 高再現性、批次穩定 |
| PURE-EVs + Columns Pack | HBM-PEV-PACK | 多入組 | 同上 | 同上 | 高通量實驗 | 成本優化 |
其他方法
| 分離方法 | 生物樣本來源 | 主要顆粒產量 (Particles/mL) | 平均顆粒直徑 (nm) | 標誌物回收率 (例如 Tetraspanins) | 蛋白質純度/污染程度 (Inferred) | 處理時間與成本 (Inferred) | 主要優點 | 主要缺點與限制 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 切向流過濾 (TFF) 結合 尺寸排除色譜 (SEC) | 細胞培養液 (HeLa, MDA-MB-231 等) | 1010 至 1011 | 108–125 (NTA) | 有效回收 CD9, TSG101, Flotillin-1, HSP70 | 高純度；比超速離心法更能降低非囊泡蛋白污染，但可能殘留少量白蛋白 | 低成本且高效；處理 150 mL 約 150 分鐘，設備成本約為 UC 的十分之一 | 高產量、具可擴展性、高重複性、維持囊泡完整性、節省成本 | 操作步驟較複雜，濾膜可能堵塞，需優化跨膜壓以減少損失 |
| 切向流過濾 (TFF) | 細胞培養液、人類血漿、乳酸菌培養液 | 1.9×1010 至 2.4×1011 | 60–210 (主要為 104–155) | 高回收率；CD63 富集 25.2 倍，CD81 富集 15.3 倍，優於 UC 27 倍 | 中至高純度；比 UC 減少 40 倍白蛋白污染，但對 HDL 去除效果有限 | 快速 (25–130 分鐘)；設備成本低於 UC，適合大規模生產 | 極高產量、可擴展性強、操作溫和可保持 EV 完整性與生物活性 | 膜孔易堵塞 (Clogging)，對尺寸相近的雜質排除能力較弱 |
| 尺寸排除色譜 (SEC/qEV) | 血漿、尿液、細胞培養液 (HEK293T 等) | 中等至高產量 (回收率約 10–80%) | 30–200 (主要為 50–150) | 高回收率；CD9/TSG101 富集度可達 log26 倍以上 | 極高純度；有效移除 90–99% 蛋白質與高密度脂蛋白 (HDL) | 快速 (20–60 分鐘)；不需昂貴設備，市售管柱具中等耗材成本 | 條件溫和，能保持 EV 結構完整性與生物活性，重複性好，適合蛋白質組學 | 樣本會被高度稀釋需後續濃縮，管柱載量有限，難以完全分離相近尺寸脂蛋白 |
| 超速離心法 (UC/dUC) | 血漿、細胞培養液、生乳 | 1.1×1010 至 1.47×1012 | 20–200 (分佈廣，可至 450) | 中等回收率 (5–56.6%)；檢測到 CD9, CD63, CD81, TSG101 | 中至低純度；易受白蛋白、脂蛋白、病毒及蛋白質聚集體污染 | 耗時長 (2–96 小時)；設備成本極高，但長期運行之耗材成本低 | 技術成熟的金標準方法，操作簡單直接，可處理大體積樣本 | 產量低、易導致顆粒聚集、高離心力可能損壞囊泡結構 |
| 密度梯度離心 (DGC/DGUC) | 細胞培養液、血漿、尿液 | 低產量 (回收率低於 UC) | 30–200 (依密度帶分選) | 能精準回收特定密度之標誌物 (如 CD9, CD81, ALIX) | 極高純度；能最有效移除脂蛋白、非囊泡蛋白與病毒顆粒 | 極度耗時 (16–24 小時)；操作複雜，技術門檻高且通量低 | 解析度最高，能依密度精確分離 EV 亞群 | 產量損失大，操作依賴人員技術，高濃度介質可能影響 EV 活性 |
| 不對稱流場流分級 (AF4) | 細胞培養液 (B16-F10 等)、血漿、尿液 | 分析級回收 (數微克級) | 1–1000 (可區分 Exomere 35, Exo-S 60, Exo-L 90+) | 高回收率且重複性佳；可精確區分不同亞群標誌物 | 極高純度；無固定相交互作用，具 1 nm 級高解析度，排除顆粒聚集體 | 分離快速 (< 1 小時)；但儀器成本高昂且需專業操作技術 | 高解析度分離子群體、無需標記、溫和無剪切力、維持原始狀態 | 設備昂貴，樣本加樣量小且會被高度稀釋，需後續濃縮 |
| 免疫親和捕捉 (IAC/MagCapture) | 血漿、血清、臨床樣本 | 低產量 (回收率約 10–14%) | 30–300 (依目標抗原而定) | 極高特異性；針對 CD9, CD63, CD81 或 PS+ 特異性捕獲 | 極高純度；有效耗竭高豐度蛋白，幾乎不含非特異性雜質 | 耗時長 (1–20 小時)；抗體與磁珠成本高，難以大規模擴展 | 特異性與純度最高，可分離特定細胞來源或子類群體，再現性好 | 產量最低，高度依賴抗體品質，捕獲後可能干擾功能研究 |
| 微流體晶片技術 (Microfluidics/ExoDisc) | 血漿、血清、尿液、腦脊液、臨床血樣 | 高分離效率 (回收率 89–95%) | 20–1000 (依設計而定) | 高特異性與靈敏度；適用於診斷用標誌物檢測 | 極高純度；自動化程度高，純度比 UC 提升 10 倍以上 | 極快 (25–40 分鐘)；適合 POCT，但晶片製作與設備成本高 | 樣本消耗量極低 ( μL 級)、高度自動化、整合度高 | 設備普及率低、吞吐量受限 (難以大規模生產)、易堵塞 |
| 聚合物沉澱法 (PEG/ExoQuick) | 血漿、血清 | 高產量 (回收率達 90%) | 60–180 (分佈較廣) | 回收量最高，但 CD9 等標誌物信號變異大 | 低純度；極易共沉澱脂蛋白、白蛋白與非 EV 蛋白質 | 極低時間成本；操作簡單，需孵育 0.5–12 小時，不需特殊設備 | 操作極簡便，產量最高，適合處理臨床小體積樣本 | 純度極差，沉澱劑殘留可能干擾下游質譜分析，再現性受影響 |
| 乙酸預處理結合超速離心 | 生乳 (牛) | 1.25×1012 | < 150 | CD63 標誌物富集能力提高，條帶更銳利 | 中等純度；有效去除大部分酪蛋白污染 | 處理時間略增加，增加酸化步驟，設備成本維持低廉 | 顯著提高乳源 EV 之產率與純度，有效去除乳源性雜質 | 酸化環境可能影響 EV 膜完整性、內部載荷及生物活性 |
| ExoTFF (雜合電動力學-TFF) | 人類血漿 | 5.5×1011 | 約 155 | CD9 回收率約 95% | 高純度；雜質比傳統 TFF 減少 80%，有效去除白蛋白 | 處理快速 (500 mL 需 45–50 分鐘)；成本具擴展潛力 | 回收率極高，同時具備緩衝液交換與體積濃縮功能，低剪切力 | 對於與 EV 物理性質相似的脂蛋白 (VLDL/LDL) 排除仍具挑戰性 |
| 強陰離子交換磁珠法 (MagNet) | 人類血漿 | 2.2×1010 | 95 | CD9 與 TSG101 回收率極佳 (>log26 倍) | 極高純度；具備最高的蛋白質組覆蓋率，污染物移除顯著 | 時間適宜，適合高通量自動化處理，磁珠耗材成本高 | 純度極高且粒徑分佈窄，極適合後續蛋白質組學分析 | 顆粒總產量相對較低 (Modest yield) |
| 介電電泳微流體 (DEP) | 血漿、細胞培養液 | 回收率約 81% | 50–200 | 高選擇性，依表面電荷/極化特性分選 | 極高純度 (可達 95% 以上) | 處理極快 (秒級至分鐘級)；開發成本高 | 無須標記、單步驟完成分離、可精確分選亞群 | 產量極低 (僅供診斷分析)、易受焦耳熱效應影響、通量受限 |
| 疏水交互作用色譜 (PET C-CP 纖維) | 生牛乳 (Bovine Milk) | ∼4×1011 | Not in source | Not in source | 極高純度；去除 >95% 基質相關伴隨物 | 處理極快 (20 分鐘)；管柱成本極低 (< 5 USD) | 高吞吐量與高產率，成本極低，適合大規模生產 | 目前主要應用於牛乳，其他生物樣本適用性待驗證 |